上海軒澤康生物ELISA試劑盒種類繁多，根據產品名稱原理大致分為間接法、夾心法、競爭法、捕獲包被法（也稱為反向間接法，比較少見）。其中各類型試劑盒的基本原理可電詢我司業務人員進行詳細了解。以下是關于各類型ELISA試劑盒及適用類型：

①間接法：測定總抗體或IgG抗體

②抗體夾心法：測定二價或二價以上大分子抗原

③抗原夾心法：測定抗體

④抗體競爭法：測定抗體

⑤抗原競爭法：測定只有一個抗原決定簇的小分子半抗原

⑥捕獲包被法：測定IgM,傳染病的早期診斷

檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被血紅蛋白（Hb）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血紅蛋白（Hb）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

試劑的準備：20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

科研雞血紅蛋白(Hb)測定試劑盒ELISA操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

科研雞血紅蛋白(Hb)測定試劑盒ELISA實驗中問題解答：

【檢測的結果沒有吸光度值或吸光度值很低】

可能造成的原因：1.使用的試劑盒已過有效期 2. 沒有充分回溫、孵育的溫度太低

上海軒澤康生物為您解答：建議更換有效期以內的試劑盒，使用同一批次試劑盒內的內容物并嚴格按照說明書步驟進行操作。在實驗操作的整個過程中仔細觀察恒溫箱的溫度。

【吸光度值偏高】

可能造成的原因：孵育溫度過高，反應時間過長。

上海軒澤康生物為您解答：建議調整孵育環境的溫度，如無法調整室內溫度請將顯色時間適當縮短，控制反應時間。

【陰性樣本的吸光度值低】

可能造成的原因：酶標板孔中的試劑未充分的混和

上海軒澤康生物為您解答：注意操作的方法，注意洗滌時的方法。

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