檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被牙本質涎磷蛋白抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牙本質涎磷蛋白呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

實驗所需自備試驗器材：

1.      酶標儀（450nm）

2.      高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.      37℃恒溫箱

4.      蒸餾水或去離子水

人牙本質涎磷蛋白(DSPP)ELISA檢測試劑盒組成：（檢測范圍請參考說明書）

常見樣本處理及要求：

可用于ELISA實驗的樣本一般有血清、血漿、尿液、細胞培養上清液以及組織勻漿等。不同樣本類型的預處理方法也不同。

液體樣本處理原則：所有的液體樣本，用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）

【血清樣本】：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4℃過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注意事項：收集血液樣本應避免溶血，因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質，這種情況下，ELISA實驗中將會出現非特異性顯色反應，導致檢測結果不準確，出現假陽性結果。另外，樣本還應避免細菌污染，因為細菌可能含有內源性HRP，也會導致檢測結果不準確。

【血漿樣本】：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注意事項：檢測前請仔細閱讀ELISA試劑盒說明書，查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求。

實驗操作中注意事項：

1.      嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2.      洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3.      消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4.      底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

5.      避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6.      在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7.      平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8.      任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9.      不能使用過期產品。

10.   如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

請嚴格按照產品說明書操作，如需產品說明書可直接來電索取或添加客服索取。

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